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胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):892 更新時(shí)間:2021-07-07

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原裝 Roche11583794001
(蛋白酶抑制劑)
Aprotinin 6ku/25ku Usbio分裝
(抑蛋白酶肽,)
ATP,2Na,3H2O5'-三磷酸腺苷 1g/5g Amresco分裝
(ATP,2Na,3H2O5'-三磷酸腺苷)
Avidin 1mg原裝/2mg原裝 Sigma A9275
(親合素)
Bacitracin 500ku原裝/250ku原裝 Amresco E952
()
Baird-ParkerAgarBase 2kg原裝/500g原裝 BD 276810
BarbitalSodium 25g原裝/100g原裝 Sigma B0500
(酸鈉)
BCIP 100mg/250mg/1g/10g原裝 Amresco 0885
BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E116
BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E692
b-Cyclodextran 5g/25g原裝/100g原裝 Sigma C4767
(b-環(huán)狀糊精)
BDliverVealAgar 500g原裝 BD 259100
BeefExtract 500g原裝/500g BD211520/國(guó)產(chǎn)
(牛肉膏)
BeefPowder 500g/北京產(chǎn)1kg OXOID LP0029
(牛肉粉)
Benzamidine,HCI 5g/25g Amresco分裝
(鹽酸苯甲脒,鹽酸芐脒)
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