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細(xì)胞簡介：

骨膜是覆蓋在骨質(zhì)表面的一層結(jié)締組織。骨膜通過夏皮式纖維錨定在骨質(zhì)上，充當(dāng)外部肌肉組織和內(nèi)部骨質(zhì)的連接橋梁，這種結(jié)構(gòu)有助于維持骨膜的完整性。

骨膜由兩部分組成，外層疏松的纖維層與內(nèi)層致密的細(xì)胞層，纖維層中含有成纖維細(xì)胞、膠原纖維、彈力纖維及微管等。細(xì)胞層中多為骨膜源干細(xì)胞，這種干細(xì)胞與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞類似，具有多向分化的潛能。

骨質(zhì)修復(fù)、重塑和更新與骨膜中的干細(xì)胞密切相關(guān)。在正常生理狀況下，骨膜組織發(fā)揮著維持骨質(zhì)更新及重塑的作用，其中的干細(xì)胞既可以通過膜內(nèi)成骨方式分化為成骨細(xì)胞，也可通過軟骨內(nèi)成骨方式分化為軟骨細(xì)胞。

細(xì)胞特性：

1） 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常關(guān)節(jié)骨膜組織。

2) 細(xì)胞鑒定：CD90或CD73熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細(xì)胞生長方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)試劑。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠肝素(HS)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： HS ELISA Kit

Mouse islet cell aibody (ICA) ELISA Kit 小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)檢測(cè)試劑盒

Ratheatshockprotein60,hSP-60ELISAKit 大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforG-CSFELISAKit大鼠粒細(xì)胞集落刺激因子

細(xì)胞谷草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

Raetinol-bindingprotein,RBPELISAKit大鼠結(jié)合蛋白(RBP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FCGR2A重組食蟹猴 CD32a / FCGR2A 蛋白 Protein

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EPDR1 Protein Human 重組人 EPDR1 蛋白

TF Protein Mouse 重組小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28 0.5mgMrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28) 線粒體核糖體蛋白L28(抗原)

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FCGR2A重組食蟹猴 CD32a / FCGR2A 蛋白 Protein

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小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human Salmonella typhi aigen (St-Ag) ELISA Kit 人傷寒抗原(St-Ag)檢測(cè)試劑盒

Humanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit 人潛伏膜蛋白1(LMP-1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-glycoproteinaibody,GP檢測(cè)試劑盒人抗糖蛋白抗體(GP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物亮(leucine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

HumanvisfatinELISAKit人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠骨膜干細(xì)胞小鼠脫氫酶E1(PDHE1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠高敏狀腺原酸(u-T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。